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Práctica 16: IMVIC

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INDOL Fundamento La triptofanasa degrada el triptófano y se libera indol y para ver si la bacteria es capaz de degradar la triptofanasa se usa el reactivo de Kovac, que reacciona con el indol formando un compuesto de color rosa. Objetivo Para ver si la bacteria produce triptofanasa y como resultado indol. Material y Reactivos Reactivo de Kovac, bacterias 3 y 7, un tubo con agua peptona y asa de siembra de platino. Procedimiento 1. Inocular con un asa de platino una colonia en el agua peptona. 2. Añadir 5 gotas de reactivo Kovac al tubo. 3. Frotar con las manos el tubo para que se mezcle. Resultados e Interpretación - Si se forma una banda rosa en la superficie es + y es capaz de degradar triptófano. - Si se forma una banda amarilla en la superficie es – y no es capaz de degradar triptófano. (Negativo) ROJO METILO Fundamento Se realiza para determinar la capacidad de una bacteria de fermentar la glucosa por la vía ácido mixta, con prod...
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Práctico 15: PRUEBA DE LA POTASA

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Fundamento El KOH en su concentración lisa la membrana de las bacterias Gram-, liberándose el contenido celular y formándose un hilo por la desnaturalización de las proteínas y ADN. Objetivo Es una prueba de discriminación rápida de Gram+ o - Material y Reactivos KOH, H2O destilada, asa de siembra de platino, mechero Bunsen, bacterias 3 y 7 y portas. Procedimiento 1. En un porta colocamos 1 gota de potasa. 2. Con un asa de platino depositamos una colonia sobre la potasa y lo disolvemos. Resultados e Interpretación - Si es Gram - : se observa una viscosidad o hilo en el medio. - Si es Gram+ : No se observa viscosidad en el medio.
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Práctica 14: PRUEBA DE LA COAGULASA

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Fundamento La coagulasa es una enzima que fibrinógeno en fibrina. Objetivo Determinar la capacidad de la bacteria de coagular el plasma por acción de la coagulasa. Material y Reactivos Tubos ensayo, bacterias 3 y 7, asa de siembra de platino, plasma, micropipeta, mechero Bunsen. Procedimiento 1. En un tubo ponemos 500µl de plasma y con una asa de platino, disolvemos la colonia en el tubo. 2. Incubar en el baño 4h. Resultados e Interpretación - Si hay coágulo es + ( Staphylococcus aureus) - No hay coágulo es – ( Staphylococccus sp.)
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Práctica 13: PRUEBA DE LA OXIDASA

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Fundamento La citocromooxidasa es una enzima que en presencia de oxígeno, oxida la fenilendiamina y forma indofenol, que es violeta. Objetivo Consiste en poner una colonia en contacto con fenilendiamina para saber si sintetiza oxidasa, lo cual se volverá violeta. Material y Reactivos Tiras reactivas, bacterias 3 y 7, asa de siembra de platino y mechero Bunsen. Procedimiento 1. Con el asa de platino, depositar una colonia sobre la zona reactiva de la tira. 2. Frotar la colonia en la zona reactiva con el asa. Resultados e Interpretación Esperamos unos segundos y leemos resultados: - Si la zona reactiva se pone violeta es + - Si la zona reactiva se pone rosado o no cambia de color es -  
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Práctica 12: PRUEBA DE LA CATALASA

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Fundamento La catalasa hidroliza el peróxido de hidrógeno en agua y oxígeno gaseoso, que se libera formando burbujas. Objetivo Añadir peróxido de hidrógeno a una colonia bacteriana y observar si se forman burbujas o no. Material y Reactivos Portas, H2O2, bacterias 3 y 7, asa de siembra de platino, mechero Bunsen, tubos ensayo. Procedimiento 1. Con un asa de platino depositamos una colonia en un porta. 2. Añadir una gota de H2O2 y removemos con el propio asa. 3. Esta prueba también se puede realizar en tubo de ensayo. Resultados e Interpretación Esperamos unos segundos y observamos si se forman burbujas o no. Si se forman burbujas es + y si no se forman -.
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Práctica 11: SIEMBRA EN VARIOS MEDIOS

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SIEMBRA EN MEDIOS SÓLIDOS EN PLACA Agar sangre Es un medio para bacterias Gram+, especialmente Estreptococos y Estafilococos. Agar Macconkey Es un medio selectivo y diferencial para enterobacterias e inhibe el crecimiento de las Gram+. Contiene sales biliares y cristal violeta. Agar Levine o EMB Medio selectivo y diferencial para aislamiento de enterobacterias Gram+. Contiene eosina y azul de metileno. SIEMBRA EN MEDIO SÓLIDO EN TUBO Agar KIA Consiste en una siembra por picadura. Medio para la diferenciación de enterobacterias. Contiene glucosa, lactosa, peptona, indicador rojo fenol, tiosulfato de sodio y sales de hierro. Material y Reactivos Placas con medios de cultivo sangre, Levine, Macconkey y KIA, asa de siembra de platino, mechero Bunsen, bacterias 3 y 7. Resultados e Interpretación Hemólisis total > β (Es transparente y crea un halo transparente). Hemólisis parcial > α (Presenta un aspecto turbio). NO hemólisis > γ Aga...
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Práctica 10: ANTIBIOGRAMA

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Fundamento Las técnicas de antibiograma son las utilizadas en el laboratorio de microbiología para estudiar la actividad de los antimicrobianos frente a los microorganismos responsables de las infecciones. Objetivo El objetivo es el de medir la sensibilidad de una cepa bacteriana y seguir la evolución de las resistencias bacterianas. Material y Reactivos Tubos de ensayo, asa de siembra de platino, vasos de precipitado, mechero Bunsen, micropipeta, placa Petri con medio de cultivo, asa Drigalsky, pinzas, discos de antibióticos, SSF, bacterias 3 y 7, alcohol, 0’5 Mcfarland y gradilla. Protocolo 1. Cogemos 2 tubos de ensayo y ponemos 5ml de SSF en cada uno. 2. Con un asa de siembra la esterilizamos con el mechero y tomamos una muestra de las bacterias 3 y 7. 3. Inoculamos la muestra en los tubos de ensayo con el SSF, haciendo una suspensión bacteriana. 4. Disgregamos con el mismo asa la muestra, hasta que coja un tono de turbidez como el 0’5 (aprox.), compar...
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