Práctica 1: PREPARACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO
Fundamento
Los medios de cultivo suponen el aporte de aquellos
nutrientes básicos para la proliferación de microorganismos. La composición y
condiciones ambientales de estos medios dependerán de la especie que se quiera
cultivar.
Objetivo
Facilitar el aislamiento y crecimiento de las bacterias
presentes en una muestra clínica. Además obtener un desarrollo suficiente de
las bacterias de importancia clínica para permitir su identificación y características.
Material y Reactivos
Probeta, frasco de 500ml, vidrio de reloj, piseta, embudo,
placas de Petri, Agar nutritivo, balanza, microondas, tubos, gradilla, pipeta y
pim-pum.
Protocolo
Agar nutritivo en
placa Petri
1. Preparamos el material.
|
1000ml ----- 23 gr
AN
300ml ----- x
3. En el frasco vertemos unos 60ml de agua, después el AN y
por último el resto del agua y lo disolvemos bien. A continuación calentamos el
frasco en el microondas y lo sacamos antes de que entre en ebullición.
4. Se introduce el frasco en el autoclave para esterilizar,
con el tapón apretado ¼ de rosca.
5. Una vez finalizado, esterilizamos el tapón y vertemos
unos 25ml del contenido en las placas.
6. Esperamos a que se solidifique, cubrimos las placas con
papel albal y lo metemos en el frigorífico.
Agar nutritivo en
tubo indicado
1. Preparamos el material necesario y rotulamos.
2. Calculamos 250ml de AN en tubo indicado.
|
23gr ----- 1L
X ------ 0,25 L
3. Pesamos el agar con vidrio de reloj y vertemos 250ml de
H20 destilada en la probeta.
4. Disolvemos el AN y el agua en un frasco y agitamos. A
continuación, lo calentamos en el microondas y lo sacamos antes de que entre en
ebullición.
5. Vertemos 10ml del
medio de cultivo con una pipeta en cada tubo (para 25 tubos).
6. A continuación, ponemos papel albal en la abertura de
cada tubo, los colocamos en una gradilla y lo metemos en el autoclave para
esterilizarlo.
7. Una vez finalizado, colocamos los tubos en posición
semi-horizontal en la base de la gradilla y esperamos a que solidifique.
8. Por último colocamos papel albal y lo metemos en el
frigorífico.
Caldo Nutritivo
Se realiza de la misma forma que el AN en tubos indicados,
aunque también se puede realizar en tubos pequeños, ya que no necesita que se
coloque en posición semi-horizontal para que solidifique.
USO DEL AUTOCLAVE
1. Sacamos la cesta y llenamos con agua destilada hasta que
cubra la resistencia sin sobrepasar la rejilla.
2. Colocamos la gradilla con los tubos tapados con papel
albal y los frascos en la cesta. En el tapón del frasco ponemos un papel con
los datos de la preparación en lápiz.
3. Introducimos un control de esterilización (tira) para
saber si ha alcanzado la Tª que necesitamos.
4. Metemos la cesta en el autoclave y cerramos.
5. Lo enchufamos y dejamos abierta la válvula de presión,
para que al calentarse el vapor
sustituya el aire de dentro y al final se quede solo el vapor.
6. Ajustamos el programa (121°C / 20 min) y le damos a
START.
7. Cuando la Tª esté en torno a 100°C, cerramos la válvula
de presión y durante la esterilización la presión se mantendrá a 1 atm.
8. Al finalizar, cuando la Tª esté por debajo de los 100°C iremos
abriendo poco a poco el autoclave, para que vaya perdiendo presión.
Medidas de seguridad
- Durante la preparación del medio en las placas debemos mantener
condiciones de asepsia en el ambiente, y para ello se debe dejar el mechero
abierto y pasar la boca del frasco por la llama. Además es muy importante no
hablar durante el proceso.
- Si utilizamos la cabina de flujo laminar tenemos que
desinfectar con alcohol y algodón la zona de trabajo. Encendemos el motor de la
cabina 10 min antes de empezar. Por último esterilizamos encendiendo la luz
ultravioleta, después la apagamos y encendemos la luz blanca.
Comentarios
Publicar un comentario