Práctica 2: OBSERVACIÓN DE MICROORGANISMOS
Existen 4 métodos de observación de
microorganismos:
1. Observación en fresco.
2. Técnica de la gota pendiente.
3. Tinción vital.
4. Tinción simple (azul de metileno)
1. Observación en
fresco
Fundamento
Observar microorganismos vivos en un
porta a partir de una gota de un líquido y cubrirla con un cubreobjetos.
Objetivo
La observación de microorganismos vivos
sin el empleo de colorantes.
Material
y Reactivos
Portas, cubres, pipetas Pasteur, tubos de
vidrio, gradilla y muestra de agua (charco y Río Segura).
Protocolo
1. Es importante antes de tomar la
muestra invertir el frasco varias veces, para que todo lo que contiene el agua,
se mezcle.
2. Tomamos la muestra de charco con una
pipeta Pasteur, la depositamos en un porta y colocamos un cubre.
3. Observamos en el microscopio.
Muestra de charco en
fresco (1000x). Se observan Volvox.
4. Repetimos el mismo proceso con la
muestra de río y observamos.
2. Técnica de la
gota pendiente
Fundamento
Depositar una gota de muestra sobre un cubre
invertido y después un porta excavado sobre el cubre, de manera que la gota se
quede en el espacio entre el cubre y el excavado.
Objetivo
La observación de microorganismos vivos
sin el empleo de colorantes.
Material
y Reactivos
Porta excavado, cubres, pipetas Pasteur,
tubos de vidrio, gradilla y muestra de agua (charco y Río Segura).
Protocolo
1. Es importante antes de tomar la
muestra invertir el frasco varias veces, para que todo lo que contiene el agua,
se mezcle.
2. Tomamos la muestra de charco con una
pipeta Pasteur, la depositamos en un cubre y colocamos el porta excavado de
forma invertida.
3. Observamos en el microscopio.
Muestra charco con gota pendiente (1000x)
4. Repetimos el mismo proceso con la
muestra de río y observamos.
Muestra de río con gota pendiente
(1000x). Se observa una Diatomea.
Análisis
de resultados
La muestra de río es transparente y la de
charco es de color amarillo porque está más concentrado. En la técnica en
fresco no se emplea el porta excavado por lo que la gota está aplastada,
mientras que la gota pendiente si que se emplea y la gota está en suspensión.
3. Tinción vital
Fundamento
Está técnica consiste en teñir los
microorganismos vivos para poder observarlos y diferenciarlos.
Objetivo
Observar microorganismos vivos y sus
estructuras.
Material
y Reactivos
Micropipeta de 1000µl, puntas, gradilla,
mechero Bunsen, matraz aforado 100ml, vaso de precipitado, embudo, asa de
siembra, H2O destilada, caldo de cultivo y fucsina en una dilución de 100ml en
1/1000.
1---1000ml⟹ x= 0,1ml; 100µl x--- 100ml |
Protocolo
1. Preparamos
el material.
2.
Preparamos la dilución.
3.
Esterilizamos el asa de siembra y la boca del tubo de caldo de cultivo con la
llama.
4. A
continuación, cogemos una gota del caldo con el asa y la depositamos en un porta.
Encima ponemos una gota de la tinción y lo presionamos con un cubre.
5. Observamos
la muestra en el microscopio.
4. Tinción simple (azul de metileno)
Fundamento
La tinción con azul de metileno (cloruro
de metiltionina) es una tinción simple positiva (colorea las bacterias), rápida
y sencilla.
Objetivo
Diferenciar los distintos tipos de microorganismos y su morfología.
Material
y Reactivos
Asa de siembra, gradilla, H20 destilada, mechero Bunsen,
portaobjetos, batea, Actimel y azul de metileno.
Protocolo
1. Preparamos el material.
2. Esterilizamos el asa de siembra.
3. Introducimos el asa en el bote, la
enfriamos al principio de éste y cogemos la muestra del fondo, moviendo bien
con el asa.
4. Depositamos la muestra en el centro
del porta y hacemos una buena extensión con el propio asa de siembra.
5. Fijamos la extensión por calor,
pasando el porta por encima de la llama hasta que se seque, sin dejarlo mucho
tiempo para que no se rompa.
6. Colocamos el porta en el puente de
tinción y cubrimos la extensión con el azul de metileno. Lo dejamos 2min
actuando.
7. Pasados 2min, lavamos abundante con
H20 destilada, sin incidir directamente sobre la extensión para no arrastrarla.
8. Lo dejamos secar y visualizamos al
microscopio.
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