Práctica 7: TINCIÓN ZIEHL-NEELSEN

Fundamento

La tinción Ziehl-Neelsen consta de tres fases:

1. Una tinción en caliente con un colorante básico, para que todas las bacterias se tiñan de rojo.

2. Decoloración en frío con una mezcla ácido-alcohol, el cual arrastra el colorante inicial y las decolora. De modo que las BAAR permanecen teñidas de rojo y el resto de las bacterias incoloras.

3. Coloración de contraste con azul de metileno, de manera que las BAAR permanecen rojas y el resto de las bacterias de azul.

Objetivo

Identificar si la bacteria será ácido-alcohol resistente (rojo) o no (azul).

Material y Reactivos

Fucsina fenicada, azul de metileno, alcohol-clorhídrico, H2O destilada, portas, mechero Bunsen, asa de siembra de platino, suero fisiológico, bacterias 3 y 7, torunda, alcohol y rejilla.

Protocolo

1. Preparamos el material.

2. Esterilizamos el asa de siembra con la llama y enfriamos tocando en una zona donde no haya cultivo.

3. La muestra se toma de arriba abajo del tubo y extendemos el asa con la muestra y una gota de SSF en un porta.

4. Fijamos por calor la extensión, sin dejarlo mucho tiempo para que el porta no se rompa.

5. Colocamos el porta en una rejilla y cubrimos con fucsina fenicada.

6. Calentamos el porta con la torunda con alcohol hasta que emita vapores, lo hacemos durante 5 min.

                                             

7. Lavamos el porta y escurrir.

8. Cubrimos el porta con alcohol-clorhídrico y lo dejamos 2 min.

9. Lavar el porta con H2O destilada y escurrir.

10. Cubrimos el porta con azul de metileno y dejamos 2 min.

11. Lavar el porta con H2O destilada, escurrir y dejamos secar.

12. Observamos al microscopio.

Resultados

Son bacterias ácido-alcohol resistentes: observamos estafilococos y levaduras.